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酵母饲料中贴壁细胞的保藏方法是怎样的
编辑:徐州双航饲料加工厂   时间:2019-08-22

 附着细胞(附着细胞)生长在可附着的载体表面。细胞可以在表面生长和繁殖,这取决于其自身分泌的或培养基中提供的粘附因子。当酵母饲料中的细胞在此表面生长时,它们通常形成两种形式:成纤维细胞样细胞或上皮样细胞。

  1。观察细胞状态。贴壁细胞密度达到80%,可以通过冷冻保存的方式保存,并对细胞状态进行拍照和记录。

  2。电池清洁。灭菌后,转移到生物安全柜,从培养皿中取出培养基,加入12毫升PBS,轻轻摇动培养皿清洗细胞,然后吸收PBS清洗液。

  3。细胞消化。在培养皿中加入2毫升胰蛋白酶,完全覆盖细胞,并在显微镜下观察(在此期间禁止摇动培养皿)。当细胞开始脱落时,它们立即被转移到生物安全柜。除去大部分胰蛋白酶后,将剩余的0.5毫升胰蛋白酶转移到培养箱中进一步消化,每30秒肉眼观察细胞状态。细胞完全流沙状脱落,转移到生物安全柜。加入12毫升完整的培养基以停止消化。

  4。细胞离心。将消化结束后的细胞悬液均匀吹入15 ml离心管中,静置1000 r/min(110 g),离心3分钟。

  5。细胞冷冻保存。离心后,去除细胞上清液。根据冷冻细胞的数量5*10^5/ml,将冷冻细胞吸收并悬浮。将细胞均匀吹入相应的冻存管中进行冻存。

  6。细胞保存。将酵母饲料冷冻管贴上标签,置于程序化冷却箱中。把冷冻室放在4点30分钟。冷冻室被转移到-80进行过夜储存。冷冻细胞转移到液氮中储存。


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